高效液相色谱分析网络三维虚拟实验室

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高效液相色谱分析网络三维虚拟实验室

学院:公共卫生学院
所属学科:预防医学类
专业门类:卫生检验与检疫专业
项目申报人:高蓉
课程年份:2023
课时数:1
课程唯一编号:2023

实验简介:

采用高效液相色谱法保留值对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯进行定性,归一化法定量。熟悉高效液相色谱的结构和操作步骤。

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学院:公共卫生学院
所属学科:预防医学类
专业门类:卫生检验与检疫专业
项目负责人:高蓉
课程年份:2023
课时数:1
课程唯一编号:2023

实验简介:

采用高效液相色谱法保留值对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯进行定性,归一化法定量。熟悉高效液相色谱的结构和操作步骤。

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  • 实验教学目标
  • 实验原理
  • 实验教学过程与实验方法
  • 实验步骤
  • 实验结果与结论

1、学习HPLC保留值定性方法和归一化法定量方法。

2、熟悉HPLC分析操作。

在对羟基苯甲酸酯类混合物中含有对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯,它们均为强极性化合物,因此可以采用反相HPLC进行分析,选用非极性的C-18烷基键合相为固定相,甲醇水溶液为流动相。

由于在一定的实验条件下,酯类各组分的保留值保持恒定,因此在相同的实验条件下,将测得各未知物的各组分保留时间,与已知纯酯类各组分的保留时间进行比较对照,即可确定未知物中各组分是否存在。这种利用纯物质对照进行定性分析的方法,适用于来源已知、组分简单的混合物定性分析。本实验进一步采用归一化法定量。

引导,交互,考核

一、储备标准溶液配置

1、打开分析天平的电源;

2、拖拽称量纸至分析天平,将称量纸放在分析天平上;

3、点击归零按键,天平读数为“0.0000”;

4、使用药匙取对羟基苯甲酸甲酯,放入分析天平中的称量纸上;

5、在重量输入框中输入“1”,回车,用分析天平准确称量1.0000g

6、拖拽称好的药品至至一个干净的烧杯中,将药品倒入烧杯中;

7、拖拽甲醇至装有药品的烧杯,在烧杯中加入约10ml甲醇,用玻璃棒搅拌至固体药品全部溶解。

8、拖拽烧杯至1#容量瓶(100ml),将溶解好的溶液用玻璃棒引流,转移至1#容量瓶中;

9、拖拽甲醇至烧杯,沿着烧杯壁向烧杯中倒入少量甲醇,用甲醇润洗烧杯;

10、拖拽烧杯至1#容量瓶,将润洗烧杯的甲醇溶液用玻璃棒引流,转移至1#容量瓶中;

11、重复润洗三次

12、拖拽甲醇至容量瓶,用玻璃杯引流向容量瓶中加入甲醇溶液至刻度线以下;

13、拖拽甲醇至一个干净的空烧杯,向其中加入少量甲醇(约15ml);

14、拖拽滴管至盛有甲醇的烧杯,用滴管取甲醇溶剂

15、拖拽取好甲醇溶剂的滴管至容量瓶,向容量瓶中滴加甲醇溶液至容量瓶中液位凹面平行于刻度线,滴管回到盛有甲醇的烧杯

16、点击1#容量瓶,用手按住容量瓶塞翻转容量瓶3次,将1#中溶液摇匀备用。

二、标准使用液配置

17、拖拽1#容量瓶至1#烧杯,向烧杯中加入少量甲酯标准储备溶液(约5ml

18、在移液枪架上,取下200μL移液枪;

19、点击移液枪取液按钮,旋转取液按钮,将量程更改为100μL

20、拖拽移液枪至移液枪头盒,(自动)打开枪头盒盖,移液枪下端套上枪头

21、拖拽移液枪至1#烧杯,吸取对羟基苯甲酸甲酯的甲醇标准储备液100μL

22、拖拽移液枪至废液瓶,吸取的标准储备也放入废液瓶中,润洗一次。

23、拖拽至1#烧杯,用移液枪吸取对羟基苯甲酸甲酯的甲醇标准储备液100μL

24、拖拽移液枪至5#容量瓶(10mL),将标准储备液移入10mL容量瓶中。

25、点击枪头,取下枪头丢入固废桶中,移液枪放回移液枪架。

26、拖拽甲醇至5#容量瓶,用玻璃杯引流,加入甲醇至刻度线下方

27、点击装有甲醇的烧杯中的滴管,用滴管吸取甲醇

28、拖拽滴管至5#容量瓶,向容量瓶中滴加甲醇溶剂至容量瓶中液位凹面平行于刻度线,滴管回到盛有甲醇的烧杯

29、点击5#容量瓶,用手按住容量瓶塞翻转容量瓶3次,将5#中溶液摇匀备用。

30、拖拽移液枪至移液枪头盒,(自动)打开枪头盒盖,移液枪下端套上枪头

31、拖拽移液枪至1#烧杯,吸取对羟基苯甲酸甲酯的甲醇标准储备液100μL

32、拖拽移液枪至废液瓶,吸取的标准储备也放入废液瓶中,润洗一次。

33、拖拽至1#烧杯,用移液枪吸取对羟基苯甲酸甲酯的甲醇标准储备液100μL

34、拖拽移液枪至9#容量瓶(10mL),将标准储备液移入9#容量瓶中。

35、点击枪头,取下枪头丢入固废桶中

36、拖拽甲醇至9#容量瓶,用玻璃杯引流,加入甲醇至刻度线下方

37、点击装有甲醇的烧杯中的滴管,用滴管吸取甲醇

38、拖拽滴管至9#容量瓶,向容量瓶中滴加甲醇溶剂至容量瓶中液位凹面平行于刻度线,滴管回到盛有甲醇的烧杯

39、点击9#容量瓶,用手按住容量瓶塞翻转容量瓶3次,将9#中溶液摇匀备用,配置的为标准混合使用液

40、点超声脱气机电源按键,打开设备电源

41、依次拖拽5种标准使用液至超声脱气机中脱气15min后;

42、拖拽5#容量瓶至5#烧杯,将配置好的标准使用液倒入烧杯中

43、拖拽一干净的注射器至5#烧杯,将烧杯中标准使用液吸入到注射器中

44、点击注射器针头,取下针头,丢弃至固废桶中

45、拖拽0.45μm针孔式过滤器至吸有标准使用液的注射器,将针孔式过滤器装作注射口上

46、拖拽注射器至10#烧杯,使用注射器通过0.45μm针孔式过滤器分别过滤标准使用液至10#烧杯,将注射器丢入固废桶中

三、待测样品准备

47、拖拽待测至15#烧杯,将待测溶液倒入到15#烧杯中

48、拖拽一干净的注射器至15#烧杯,将烧杯中待测溶液吸入到注射器中

49、点击注射器针头,取下针头,丢弃至固废桶中

50、拖拽0.45μm针孔式过滤器至吸有待测溶液的注射器,将针孔式过滤器装作注射口上

51、拖拽注射器至16#烧杯,使用注射器通过0.45μm针孔式过滤器分别过滤标准使用液至15#烧杯,将注射器丢入固废桶中

四、更换流动相

52、拖拽甲醇至1L的量筒,用量筒量取500ml左右甲醇

53、拖拽另一个1L的量筒至超纯水制水机,用量筒去超纯水1L左右;

54、拖拽两个流动相瓶至制样试验台,将流动相瓶放置在试验台上

55、拖拽盛有甲醇的量筒至较小的流动相瓶,将甲醇倒入流动相瓶

56、拖拽盛有水的量筒至较大的流动相瓶,将水倒入流动相瓶

57、拖拽两个流动相瓶至超声脱气机,放入超声脱气机中脱气15min后备用。

五、测样

58、点击A高压泵电源按键,打开A高压泵

59、点击B高压泵电源按键,打开B高压泵

60、点击检测器电源按键,打开检测器

61、点击柱温箱电源按键,打开柱温箱电源开关,置于“|”状态。

62、点击电脑主机电源按键,打开电脑电源

63、点击显示屏,页面切换为显示屏页面

64、双击桌面软件“伍丰液相”,打开测试操作软件

65、点击A高压泵前盖,打开高压泵前盖放置在桌面上

66、点击高压泵的排空阀,将高压泵的排空阀逆时针旋转半圈;

67、点击B高压泵前盖,打开高压泵前盖放置在桌面上

68、点击高压泵的排空阀,将高压泵的排空阀逆时针旋转半圈;

 

69、点击显示屏,打开测试软件操作界面

70、在电脑上的伍丰工作站参数设置区域内,A泵流量设置输入栏中输入“100”,回车,设置A泵流量为100%

71、在流速设置输入栏中输入“5”,回车,设置流速为5mL/min

72、点击“设置”,确认参数设置

73、点击“泵启动”,用流动相冲洗系统5min左右。

74、点击A高压泵排空阀,排空阀顺时针旋转半圈(复位)

75、点击B高压泵排空阀,排空阀顺时针旋转半圈(复位)

76、点击A高压泵前盖,盖上前盖;

77、点击B高压泵前盖,盖上前盖;

78、点击显示屏,打开测试软件操作界面

79、在右侧紫外检测器设置中,波长设置输入栏中输入“254”回车,设置波长为254nm

80、点击“设置”,确定波长设置

81、参数设置区域内,A泵流量设置输入栏中输入“60”,回车,设置A泵流量为60%

82、在流速设置输入栏中输入“1”,回车,设置流速为1mL/min

83、点“设置”按钮,确定设置

84、点击“泵启动”,开始测定仪器基线。

85、实时采样的图谱区域出现谱线,为仪器基线,待仪器基线平稳后,即可开始进样

86、拖拽微量注射(5μL)器至10#烧杯,用注射器吸取溶液

87、拖拽吸有溶液的微量注射器至废液瓶,将注射器中溶液排入废液瓶中,润洗注射器

88、拖拽润洗好的微量注射器至10#烧杯,吸取溶液

89、点击注射器,注射器活塞略向内推动,推排注射器中的空气泡

90、点击微量注射器,注射器放大,注射器刻度凹面与眼平行,可以观察到注射器活塞推动至4μL刻度,定容至4μL

91、拖拽微量注射器至液相色谱仪,确认进样口扳手在“LOAD”位置,将注射器插入进样口并推动活塞将样品打入进样口

92、点击进样口扳手,将其下扳至“INJECT”位置后,仪器开始自动运行测试样品。

93、单击工具条上参数设置按钮,进入数据采集参数设置对话框

94、输入实验名称,回车并确认保存路径。

95、点击“确定”,完成设置。

六、数据分析处理

96、双击桌面测试文件(生成的测试结果),打开测试结果图谱,进行数据处理;

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  • 网络要求
  • 硬件要求
  • 用户操作系统要求
客户端到服务器的带宽要求最低不能低于9M。

推荐配置:

CPUIntelI52.0Ghz

内存:4G

硬盘:300G

显卡:NVGT7001G以上

Windows764位及以上